正值欧洲泌尿外科学会（EAU）2020网络会议召开之际，有关泌尿男生殖系统肿瘤的临床及基础研究仍然是当前研究的热点。其中前列腺癌（PCa）的化疗方面有了一些新进展。今特邀青大附院泌尿外科杨学成教授就前列腺癌化疗方面的研究做一介绍和点评。

前列腺癌化疗

PCa是欧美地区男性发病率最高的恶性肿瘤，在我国也呈逐年上升趋势，其治疗方式包括根治手术、放疗、内分泌治疗和化疗。PCa是一种雄激素依赖的肿瘤，因此有着雄激素剥夺治疗(内分泌治疗)这一独特的治疗方法，但是癌细胞终究会对内分泌治疗产生耐药，从而进展成为去势抵抗性前列腺癌（mCRPC）。多西他赛用于PCa化疗最初的适应症便是 mCRPC。2004年新英格兰杂志杂志刊发的TAX-327和SWOG-9916研究显示多西他赛可以显著的延长 mCRPC生存期，从此确立了多西他赛治疗 mCRPC的一线化疗地位，并持续至今。2015年来，三项大样本临床研究结果( CHAARTED， GETUG-AFU15和 STAMPEDE)相继发布，将多西他赛化疗的适应症拓展到激素敏感性前列腺癌（mHSPC）患者。2018年欧洲肿瘤内科学年会（ESMO)上， Rizal教授汇报了一项长达12年随访的研究结果(GETUG12):针对局部晚期PCa根治性治疗前予以4个疗程多西他赛化疗联合3个月内分泌治疗(新辅助内分泌化疗)可以降低29％的肿瘤复发风险。因此目前PCa化疗主要适用于mCRPC、mHSPC和局部晚期PCa的治疗。

一项基础研究通过动物实验表明将化疗药物CPT-11联合脂肪干细胞过表达TRAIL分子可以增强对去势耐药PCa肿瘤生长的抑制作用；我们就该最新研究作一汇报。

研究背景和目的

TRAIL分子可选择性诱导肿瘤细胞凋亡，是肿瘤患者的一种理想的治疗方法；干细胞由于相对容易被病毒载体转导，使治疗性基因在干细胞中持久表达成为可能；二者优势结合使得干细胞过表达TRAIL基因已成为一个公认的治疗CRPC的新型工具。有研究表明化疗药物CPT-11可增强TRAIL诱导的PCa细胞凋亡。为此，改研究的目的是探讨联合化疗药物CPT-11能否增强脂肪干细胞中TRAIL过表达对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。

研究简介

体外：细胞实验

先筛选并确定ADSC和ADSC.sTRAIL两种细胞的CPT-11有效实验浓度；之后将实验分4组：①PC3肿瘤对照组；②PC3+CPT-11组；③PC3+ADSC+CPT-11组；④PC3+ADSC.sTRAIL+CPT-11组。通过流式细胞检测各组干预后的细胞凋亡情况进行比较各干预组对肿瘤的抑制和杀伤效应。

体内：动物实验

实验分为四组：①以慢病毒转染sTRAIL基因的hTERT-ADSC细胞株与PC3细胞在5μM浓度的CPT-11环境中共培养干预来构建联合用药模型；②以ADSC和PC3共培养在5μM浓度的CPT-11环境中进行干预；③单用5μM浓度的CPT-11化疗药物进行干预；④PBS空白对照组；通过接种PC3肿瘤细胞使裸鼠荷瘤，之后按图示方法再进行干预处理小鼠2周，最终指标为测量裸鼠肿瘤体积大小判断干预因素对肿瘤的抑制情况。

图1. hTERT.ADSC.sTRAIL细胞联合CPT-11的体外实验结果：A. 细胞死亡效应： hTERT.ADSC.sTRAIL在CPT-11 浓度为1μM组的细胞活性明显低于CPT-11 浓度为0μM组，（P＜0.05）。PI/annexin V染色的流式细胞结果显示hTERT.ADSC.sTRAIL细胞联合CPT-11DED的细胞凋亡百分比明显高于单用CPT-11DED组，*P＜0.05。

图2 A:各实验组干预步骤总结图示；B 将hTERT.ADSC.sTRAIL细胞和基因融合后的干细胞系统注射到前列腺肿瘤中；蓝色：PC3，红色：hTERT.ADSC.sTRAIL细胞；C: hTERT.ADSC.sTRAIL细胞联合CPT-11降低小鼠前列腺恶性肿瘤体积的实验结果（13.5mg/kg/天）； hTERT.ADSC.sTRAIL细胞联合CPT-11对肿瘤的抑制效果明显好于对照组或单用CPT-11组 *P＜0.05.

实验结果发现ADSC的存在显著降低PC3细胞的存活率：

体外实验结果

①在肿瘤细胞的抑制率方面：ADSC.sTRAIL联合 CPT-11化疗药组（62.7±2.0）对肿瘤细胞的抑制明显低于ADSC联合CPT-11组（76.2±3.8）和CPT-11单药组（83.0±1.0）（p<0.05）；

②PC3细胞中Annexin V实验检测细胞凋亡百分比：ADSC. sTRAIL联合 CPT-11组(37.2±2.1)明显高于 ADSC 联合 CPT-11组 (23.8±3.8)和CPT-11单药组（16.5± 1.0）（p<0.05）

体内实验结果

①裸鼠体内荷瘤实验表明：①ADSC. sTRAIL联合 CPT-11组 (89.6 ±4.6)的肿瘤体积明显小于ADSC 联合CPT-11组 （101.0±3.8）、CPT-11单药组（106.8±6.0）（p<0.05）和空白对照组（1287.8 ±35.5）（p<0.05）

②与单独使用CPT-11相比，ADSC·sTRAIL联合使用CPT-11对肿瘤生长的抑制作用高达17.2%。

综上得出结论：联合化疗药物CPT-11可增强脂肪干细胞过表达TRAIL对CRPC小鼠肿瘤生长的抑制作用。表达sTRAIL基因的治疗性干细胞联合CPT-11可以在临床试验中利用患者自身的ADSC治疗CRPC提供一种新的策略。

专家点评

本研究通过体内外实验证明了化疗药物CPT-11联合脂肪干细胞过表达TRAIL蛋白可对裸鼠的PCa细胞成瘤产生明显的抑制作用，这对临床患者的治疗提供了新的视角，进一步提高了化疗在前列腺癌治疗的地位，期待相关的临床试验研究为我们提供更有力的证据。